β-内酰胺酶是金黄色葡萄球菌和淋球菌等多种细菌产生的一种抗生素灭活酶，能裂解青霉素和头孢菌素等β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺环，使其变成无抗菌活性的物质，从而表现为产酶细菌对这类抗生素耐药。由于β-内酰胺酶检测速度快，所以检测β-内酰胺酶与常规药敏实验相比，能更快地获得结果。检测β-内酰胺酶的方法有酸度法和碘测定法。
1.菌种
临床分离的金黄色葡萄球菌（mic≤0.12μg/ml或抑菌圈直径≥29mm）、流感嗜血杆菌；标准菌株：金黄色葡萄球菌atcc29213、粪肠球菌atcc29212的18～24小时培养物。
2.试剂
头孢硝噻吩纸片等。
3.其他
无菌生理盐水、一次性接种环、无菌滴管和平皿等。
酸测量法：青霉素被β-内酶胺酶水解后成青霉素酸，ph值下降到6.8以下，用酚红指示剂，由红(紫)色 (原液：枸橼酸缓冲液ph8.5) →黄色(ph6.8以下)；淀粉-碘测定法：β内酰胺酶破坏β内酰胺环，碘与被打开β内酰胺环结合，使蓝色的淀粉-碘复合物转变成无色。β-内酰胺酶是多种不同类型以β-内酰胺类抗菌药物为底物的降解酶，通过水解β-内酰胺环造成β-内酰胺类药物失去活性，将待测菌与头孢硝噻吩作用一定时间后，如待测菌产生青霉素酶，则可水解头孢硝噻吩的β-内酰胺环，颜色由黄色变为红色。
1.细菌产生β-内酰胺酶可使易感抗生素水解而灭活。
2.对革兰阴性菌产生的β-内酰胺酶稳定的广谱青霉素和第二、三代头孢菌素，其耐药机制不是由于抗生素被β-内酰胺酶水解，而是由于抗生素与大量的β-内酰胺酶结合，使其停留于胞膜外间隙中，不能进入靶位发生抗菌作用。
3.青霉素结合蛋白（pbps）靶蛋白与抗生素亲和力降低，pbps增多或产生新的pbps均可使抗菌药物失去抗菌作用。
4.细菌的细胞壁或外膜的通透性改变，使抗生素不能或很少进入细菌体内到达作用靶位，革兰阴性菌的外膜是限制β-内酰胺类抗生素透入菌体的第一道屏障。铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药性是由于外膜非特异性孔道蛋白缺陷所致的。
挑取细菌时，菌量不要太多，尽量在纸片上涂布开。
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